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KGN 人卵巢顆粒細胞瘤細胞
（Human Ovarian Granulosa Tumor Cells）
KGN 人卵巢顆粒細胞瘤細胞
一、T25 細胞收到后處理
1、觀察
細胞在培養瓶中培養至狀態良好后灌滿完*培養基并密封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞后，請
先打開外包裝，及時核對培養瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致，并仔細查看培養瓶是否有
破損或漏液等異常情況，如有破損或漏液等異常情況，請立即拍照，并聯系工作人員處理。
2、處理
（1）75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養瓶外部。
（2）待酒精揮發完*，在顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（40x，100x，200x，
各三張）。前三天的細胞照片為重要的售后依據，不提供照片默認收到時細胞狀態良好。
（3）不要打開培養瓶蓋，將細胞放入培養箱中靜置 2-4 小時后再做處理，以穩定細胞狀態。
（4）查看細胞說明書，按照細胞說明書中描述的培養參數進行常規細胞培養操作（見“細胞說明書"第一
頁）。 ? 貼壁細胞
? 未超過 80%匯合度時，將培養瓶中的完*培養基收集至 50mL 離心管中（對比培養使用），留大約
7mL 完*培養基在細胞培養瓶中，放入培養箱中繼續培養。
? 超過 80%匯合度時，將培養瓶中的完*培養基收集至 50mL 離心管中（對比培養使用），根據情況進
行傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。首*傳代，建議 1:2 進行傳代（分兩個 T25）。傳代時
建議一瓶用原瓶中的完*培養基，另外一瓶用自行配制的完*培養基，二者進行對比培養。
? 若細胞貼壁不牢，在運輸過程中容易發生細胞脫落，這是正?，F象。請將培養瓶中所有培養液收集至
50mL 離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，收集上清（對比培養使用），往細胞沉淀中加入胰，酶 1-2mL，
輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加入 5mL 完*培養基終止消化。1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上
清，加入 1-2mL 完*培養基重懸細胞。然后按 1:2 的比例進行傳代（分兩個 T25），補充完*培養基
至 5-8mL/瓶，放入細胞培養箱中培養。 二、凍存細胞收到后處理
1、觀察
收到細胞后，請檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損、干冰已完*揮發等問題，請立即
拍照，并聯系工作人員處理。
2、處理
（1）迅速將細胞取出轉移至液氮保存，建議盡早復蘇。
（2）復蘇第一管如有細胞活性問題，請對細胞進行不同倍數拍照（40x，100x，200x，各三張），并及時
聯系工作人員處理，后續會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管。特別說明：未與我方聯系擅自復蘇
第二管，出現問題不予售后。
三、細胞復蘇
（1）確認水浴鍋已升溫至 37℃，取 5mL 預熱的完*培養基于 15mL 離心管中待用。
（2）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中
無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。
（3）將凍存管中的細胞轉移至含 5mL 完*培養基的 15mL 離心管中，1000rpm 離心 5 分鐘。
（4）棄盡上清，細胞沉淀用 1-2mL 完*培養基重懸，接種至 T25 培養瓶，補充完*培養基至 5-8mL/瓶，
放入細胞培養箱中培養。
（5）貼壁 5 小時以上或次日，更換新鮮的完*培養基繼續培養。 四、細胞傳代
（1）細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。首先，棄去培養上清，用 PBS 漂洗細胞 1-2 次。
（2）加入 1-2mL 消化液，置于培養箱中消化適當時間，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部
分變圓并脫落，即消化完*，將細胞迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入與消化液等體積的含 10%血
清的完*培養基終止消化。
（3）輕輕吹打細胞，待細胞完*脫落后轉移至 15mL 離心管，1000rpm 離心 5 分鐘。
（4）棄去上清液，然后按推薦比例進行分瓶傳代（收到細胞后首*進行傳代，推薦 1:2 比例進行分瓶傳
代），補充完*培養基至 5-8mL/瓶。
（5）放入細胞培養箱中繼續培養。 五、細胞凍存
（1）細胞生長狀態良好，細胞密度達 80%-90%，即可進行細胞凍存。首先，棄去培養上清，用 PBS 漂洗
細胞 1-2 次。
（2）加入 1-2mL 消化液，置于培養箱中消化適當時間，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部
分變圓并脫落，即消化完*，將細胞迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入與消化液等體積的含 10%血
清的完*培養基終止消化。
（3）輕輕吹打細胞，待細胞完*脫落后轉移至 15mL 離心管，1000rpm 離心 5 分鐘。
（4）棄去上清液，往細胞沉淀中加入 1mL/支的立譜沃無血清凍存液（貨號：PZ110R），混勻后加入凍存
管中，并做好標記。
（5）將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可（如果追求更理想的細胞復蘇率，也可選擇使用程序降溫盒），
24 小時后轉入液氮中長期儲存，并做好儲存記錄。
